考馬斯亮藍法測蛋白含量測定試劑盒

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更新時間：2024-07-09

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產品介紹

考馬斯亮藍法測蛋白含量測定試劑盒說明書
酶標法 100 管/96 樣
產品簡介：
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物；該復合物在 595nm 處有大吸收峰，
其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。
試驗中所需的儀器和試劑：
酶標儀、酶標板、移液器和蒸餾水。
產品內容：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
標準品：液體×1 瓶，4℃保存。
操洽步驟：
一、樣品中可溶性蛋白質提取：
液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
組織樣品：準確稱取約 0.1 g 樣品，加 1mL 提取液（自備，根據需要可以是酶提取緩沖液或者蒸餾水或
者生理鹽水），冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）
二、吸光值測定：
1. 酶標儀預熱 30 min 以上，調節(jié)波長到 595nm，蒸餾水調零。
2. 空白孔：取酶標板，在空白孔中加入 20µL 蒸餾水， 180µL 試劑一，混勻后室溫靜置 10min，于 595nm
測定吸光度，20min 內完成測定，記為 A 空白。
3. 標準孔：取酶標板，在空白孔中加入 20µL 標準液， 180µL 試劑一，混勻后室溫靜置 10min，于 595nm
測定吸光度，20min 內完成測定，記為 A 標準。
4. 測定孔：取酶標板，在空白孔中加入 20µL 待測液， 180µL 試劑一，混勻后室溫靜置 10min，于 595nm
測定吸光度，20min 內完成測定，記為 A 測定。
蛋?質含量計算：
C 待測（µg/m L）= C 標準×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)
=50×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)
C 標準：標準品蛋白質濃度，50µg/mL。
注意事項：
1．加考馬斯亮藍后，在 10~20min 內吸光值相對較穩(wěn)定，因此須在 10~20min 完成比色。
2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用 95%乙醇（自備）沖洗。
3．測定前用 1~2 個樣做預實驗，確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內，否則需要做相應稀釋。