有效期
6個(gè)月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
Aniline-4 hydroxylase(AH) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC2740-50T/24S

更新時(shí)間：2024-07-09

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1526

服務(wù)熱線

010-50973130

立即咨詢

產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

查看全部產(chǎn)品

相關(guān)文章

小鼠活器官胸腺的再生

人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β（SDF-1β/CXCL12）試劑盒使用說明書

溶酶體蛋白提取原理

6-芐基氨基喋呤（6-BA）

潮霉素B

產(chǎn)品介紹

苯胺-4-羥化酶（AH）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC2740
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑二	液體15mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑四	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑五	液體30mL×1瓶	2-8℃保存
試劑六	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑七	液體30mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑一：臨用前取一瓶加入30mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑2-8℃可保存4周；
試劑三：臨用前取一瓶加入15mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融；
試劑四：臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑2-8℃可保存4周；
試劑六：臨用前取一瓶加入15mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑2-8℃密封保存4周。
標(biāo)準(zhǔn)品：10nmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液

產(chǎn)品說明：
細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。AH在P450酶系中相當(dāng)于CYP2E1亞型，CYP2E1不僅參與了藥物的代謝，而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。
AH催化苯胺羥化后產(chǎn)生的4-氨基酚，進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榉?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif">-吲哚復(fù)合物，在630nm處有特征吸收峰；通過測定630nm吸光度增加速率，來計(jì)算AH活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、超速離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：

粗酶液提?。蛇m當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、除去細(xì)胞核和線粒體等：稱約0.5g組織，加入4℃預(yù)冷的1mL試劑一，冰上充分研磨，10 000g，4℃離心30min，取上清液，轉(zhuǎn)移到超速離心管中。
2、粗制微粒體：4℃，100 000g，離心60min，棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì)：向步驟2的沉淀中加1mL試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。
4、最終微粒體：向步驟3的沉淀中加0.5mL試劑二，蓋緊后充分震蕩溶解，即粗酶液，置于冰上待測。
二、測定步驟

分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至630nm，蒸餾水調(diào)零。
試劑五置于冰浴冷卻30min。
在EP管加入下列試劑：

試劑名稱（μL）	對照管		測定管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
粗酶液	250		250	-	-
試劑三	500		500	-	-
試劑四	-		250	-	-
蒸餾水	250		-	-	-
渦旋混勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋中準(zhǔn)確水浴30min；				-	-
試劑五	500		500	-	-
渦旋混勻，置于冰浴中5min；11000rpm，4℃離心10min；取上清液待測；				-	-
上清液	500	500		-	-
標(biāo)準(zhǔn)溶液	-	-		500	-
蒸餾水	-	-		-	500
試劑六	500	500		500	500
試劑七	500	500		500	500
渦旋混勻，室溫靜置30min；取出1mL至1mL玻璃比色皿中，測定630nm下吸光度，分別記為A對照管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管；標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。每個(gè)測定管都需設(shè)一個(gè)對照管。

三、AH活性計(jì)算
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃條件下，每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 4-氨基酚為1個(gè)酶活單位。
AH活性(U/mg prot) = C標(biāo)× V上總×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷（Cpr×V樣）÷T
= 2×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 4-氨基酚為1個(gè)酶活單位。
AH活性(U /g 質(zhì)量) = C標(biāo)×V上總×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(V樣×W÷V試劑二)÷T
=（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
C標(biāo)：10nmol/mL；V上總：反應(yīng)體系中上清總體積，1.5mL；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V樣：反應(yīng)體系中加入的樣本體積，0.25mL；W：樣本質(zhì)量，g；V試劑二：提取中加入的試劑二體積，0.5mL；T：催化反應(yīng)時(shí)間，30min。

注意事項(xiàng)：
1、如果測定吸光值A＞1.2或ΔA＞0.8，建議稀釋樣本后再測定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2、如果測定吸光值較低或接近空白OD值，建議增加樣本量后再進(jìn)行測定，注意同步修改計(jì)算公式。
3、粗酶液提取后需在當(dāng)日完成測定。