蔗糖合成酶（SS）
活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC0585
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
試劑二：臨用前加1 mL水，配制成10 mg/mL蔗糖溶液，再將其用蒸餾水稀釋為500μg/mL備用。
產(chǎn)品說(shuō)明：
蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫(kù)"器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。SS（EC 2.4.1.13）催化植物體內(nèi)游離果糖和葡萄糖合成蔗糖。
SS催化游離果糖與葡萄糖供體UDPG反應(yīng)生成蔗糖，蔗糖與間*酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。   
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測(cè)定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，80℃水浴保溫20min，冷卻后，12000rpm常溫離心10min。吸取200μL上清液于微量玻璃比色皿或者96孔板中，在480nm下測(cè)定各管吸光值（標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只做1-2管，每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)定一個(gè)對(duì)照管）。
計(jì)算ΔA測(cè)=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。
三、SS活力單位的計(jì)算

1. 按照蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1µg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SS活性(U/mg prot)=（C標(biāo)準(zhǔn)管×V1×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)）÷(V1×Cpr)÷T=50×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)÷Cpr

1. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1µg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
SS活性(U/g 質(zhì)量)=（C標(biāo)準(zhǔn)管×V1×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)）÷(W×V1÷V2)÷T=50×ΔA測(cè)÷ΔA標(biāo)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，500µg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時(shí)間，10min。
注意事項(xiàng)：
盡量在30min內(nèi)完成測(cè)定。
參考文獻(xiàn)：

1. Schrader S, Sauter J J. Seasonal changes of sucrose-phosphate synthase and sucrose synthase activities in poplar wood (Populus× canadensis Moench ‘robusta’) and their possible role in carbohydrate metabolism[J]. Journal of Plant Physiology, 2002, 159(8): 833-843.

2. Nomura T, Akazawa T. Enzymic mechanism of starch synthesis in ripening rice grains: VII. Purification and enzymic properties of sucrose synthetase[J]. Archives of biochemistry and biophysics, 1973, 156(2): 644-652.

3. Pressey R., Potato sucrose synthetase: purification, properties, and changes in activity associated with maturation[J]. Plant physiology, 1969, 44(5): 759-764.

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