小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）ELISA試劑盒

 

安全提示： 

試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作小鼠員在使用時(shí)請帶上手套并注意防護(hù)；在操作過程中也要避免 試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時(shí)，請按國家生 物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

自備實(shí)驗(yàn)器材（不提供，可代購） 
1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm，參考波長 630nm） 
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl 
3． 洗板機(jī)或洗瓶 
4． 37℃孵育箱 
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管 
 

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）ELISA試劑盒

樣本收集及儲存： 
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清： 將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于 -20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。 
2. 血清樣本： 室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于 -20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請?jiān)俅坞x心，避免反復(fù)凍融。 
3. 血漿樣本： 將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混 合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。 
※注意：
血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高 于標(biāo)準(zhǔn)品的值，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。 
 

試劑準(zhǔn)備： 
1. 試劑回溫：首先在實(shí)驗(yàn)前 30 min 將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶，請放入 37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。

 2. 配制洗滌液：預(yù)先計(jì)算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋 成 1 倍應(yīng)用液，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。

 
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）500?L凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘待其*溶解后 輕輕混勻(濃度為6000pg/ml)，按照以下濃度進(jìn)行2倍稀釋：6000、3000、1500、750、375、187.5、93.75、 0pg/ml進(jìn)行稀釋。6000pg/ml作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的點(diǎn)濃度，標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零 點(diǎn)（0pg/ml）。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液（6000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝，并將 其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖

4. 生物素化抗體工作液：預(yù)先計(jì)算好試驗(yàn)所需用量，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍 應(yīng)用工作液（稀釋前充分混勻），請?jiān)?0分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。

5. 酶結(jié)合物工作液：按每次試驗(yàn)所需用量配制，用酶結(jié)合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應(yīng)用工作液（稀釋前離心），請?jiān)?0分鐘內(nèi)使用。

6. 洗滌方法：

? 自動洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒，洗板 5 次。

? 手工洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔，靜止 30 秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板 5 次。

 

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶

結(jié)果判斷： 
1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長檢測，請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。 
2.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均 OD 值：每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值 
3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中ACE含量可通過對應(yīng)OD值 由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。 
4.若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。

2. 靈敏度： 
低可檢測小鼠 ACE 濃度達(dá) 45pg/ml， 20 個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算相應(yīng)的可檢測濃度。

3. 特異性： 
不與小鼠的 ACE-2，人的 ACE 等反應(yīng) 

4. 重復(fù)性： 
板內(nèi)，板間變異系數(shù)<10%。 

5. 回收率： 
在選取的健康小鼠血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個(gè)不同濃度水平的小鼠 ACE ，計(jì)算回收率


6. 線性稀釋： 分別在選取的 4 份健康小鼠血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 ACE ，在標(biāo)準(zhǔn)曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進(jìn)行 稀釋，評估線性

 

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶酶聯(lián)免疫試劑盒