酵母基因組DNA大量提取試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取酵母基因組 DNA。離心吸附柱中 采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效專一吸附 DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī) 化合物。提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于各種常規(guī) 操作，包括酶切、 PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。 

操作步驟： 
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在 室溫下離心。 
1、在離心管中收集酵母細(xì)胞 20-40ml(不超過(guò) 109 ce l1 s)，10000rpm 離心 1min，盡量吸除上清。 
2、酵母細(xì)胞壁的破除：向酵母菌體中加入 9ml 山梨醇 Buffer。充分懸浮菌體，加入 600ul 酵母破壁酶和 100ul 巰 基還原劑，充分混勻。30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。 
3、10000rpm 離心 lmin，棄上清，收集沉淀。 
4、向沉淀中加入 5ml 溶液 A，充分懸浮沉淀，向懸浮液中加入 500ul 的 RNase A(10mg/ml)，充分顛倒混勻，室溫 放置 10min。 
5、加入 500ul 的蛋白酶 K(10mg/ml)，充分顛倒混勻。65℃水浴消化 30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次， 直樣品消化*為止。 
6、加入 5ml 溶液 B，再加入 5ml 無(wú)水乙醇，充分顛倒混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置 2min。 
7、10000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。 
8、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否己加入無(wú)水乙醇)。10000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱 放入收集管中。 
9、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液， 10000rpm 離心 l min， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。 
10、10000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除， 否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。 
11、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 5min， 10000rpm 離心 l min。 
12、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，10000rpm 離心 2 min，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。 

注意事項(xiàng)： 
1、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。 
2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。 
3、如果實(shí)驗(yàn)中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。 
4、洗脫緩沖液的體積不少于 1ml，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要 用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)此范圍)， pH 值低于 7. 0 會(huì)降低洗脫效率。 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。 
5、 DNA 濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。 回 收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰，OD260 值為 1.0 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗 脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。 

相關(guān)產(chǎn)品：
D1010 6×DNA Loading Buffer 
T1060 50×TAE 緩沖液 T1050 5×TBE 緩沖液 
M1060 D2000 DNA Ladder M1400 1kb DNA Ladder 
G8142 GoldView II 型核酸染色劑(5000×) 
D1160 酵母質(zhì)粒提取試劑盒

相關(guān)文獻(xiàn)：

《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu，Xuewu Guo，Jun Lu，Xi Sun，F(xiàn)eng Li，Yefu Chen，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong，Guanglu Wang，Cuiying Zhang，Haigang Tan，Xi Sun，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844
 

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