谷丙轉氨酶（GPT/ALT）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1555
規(guī)格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：提供1個8 mL棕瓶；臨用前取1支試劑一倒入空瓶中，用2 mL蒸餾水溶解，再用溶液將試劑一殘留試劑潤洗下來；該試劑為凍干試劑，可能存在肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象，此現(xiàn)象不影響使用，實際質量相同；

2. 標準液：20 μmol/mL丙 酮酸鈉。

產品說明：
谷丙轉氨酶又叫丙*酸氨基轉移酶（EC 2.6.1.2），GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化氨基酸和酮酸轉氨基反應，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動物肝細胞GPT活性很高，當肝細胞壞死，GPT釋放到血液中，血清GPT活性顯著增高。因此，GPT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標。
GPT催化丙*酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉氨基反應，生成丙 酮酸和谷*酸；加入2,4*溶液，不僅終止上述反應，而且與酮酸中的羰基加成，生成丙 酮酸苯腙；苯腙在堿性條件下呈紅棕色，可以在505nm讀取吸光值并計算酶活力。


注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
實驗實例：

1. 取0.1g兔子肝臟組織加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后再按照測定步驟操作，用96孔板測得A測定管=0.701，A對照管=0.271，計算?A=A測定管-A對照管=0.701-0.271=0.430，帶入標準曲線y=0.2796x+0.0476，計算x=（0.430-0.0476）÷0.2796=1.368，按樣本質量計算酶活得：

GPT活性（U/g質量）=12x÷W=12×1.368÷0.1=164.16 U/g質量。

1. 取兔血清直接檢測，使用96孔板測得A測定管=0.307，A對照管=0.247，計算?A=A測定管-A對照管=0.307-0.247=0.06，帶入標準曲線y=0.2796x+0.0476，計算x=（0.06-0.0476）÷0.2796=0.044，按血清（漿）體積計算酶活得：

GPT活性（U/mL）=12x=12×0.044=0.528 U/mL。
相關發(fā)表文獻：

1. Yong Li, Fengjun Cao, Mingxing Li,et al. Hydroxychloroquine induced lung cancer suppression by enhancing chemo-sensitization and promoting the transition of M2-TAMs to M1-like macrophages. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. October 2018;(IF5.646)

2. Poopal R K, Zhang J, Zhao R, et al. Biochemical and behavior effects induced by diheptyl phthalate (DHpP) and Diisodecyl phthalate (DIDP) exposed to zebrafish[J]. Chemosphere, 2020: 126498.

參考文獻：

1. Zhao W, Wei H. Effects of cadmium on transaminase activities and structures of tissues in freshwater giant prawn (Macrobrachium rosenbergii) [J]. Journal of Fisheries of China, 1995,19(001):21-27.

2. Ohgami N, Upadhyay S, Kabata A, et al. Determination of the activities of glutamic oxaloacetic transaminase and glutamic pyruvic transaminase in a microfluidic system[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2007, 22(7): 1330-1336.

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