更新時間:2025-10-13
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1、Oligo(dT ) Primer也可稱為寡聚胸腺嘧啶引物,是只有胸腺嘧啶組成的寡居核苷酸鏈,長度范圍在10~20個堿基之間,常用的Oligo(dT )Primer有15堿基、16堿基和18堿基。
Oligo(dT ) Primer利用了堿基互補配對的原則以及mRNA含有poly(A)尾巴的特點,巧妙設(shè)計而成。由于這個特點,使得Oligo(dT ) Primer只能和mRNA配對,并在適宜的條件下完成反轉(zhuǎn)錄。原核生物的RNA,真核生物的rRNA和tRNA無poly(A)尾巴,因此用Oligo(dT ) Primer作為反轉(zhuǎn)錄引物時,這些RNA均不能作為模板。這限制了反轉(zhuǎn)錄后獲得的總cDNA的數(shù)量和種類。另外,若mRNA過長,可能會形成二級結(jié)構(gòu),這時Oligo(dT ) Primer擴增也會有一定的困難。同樣提示我們,在反轉(zhuǎn)錄時根據(jù)需要選擇引物。
2、Random Primers即隨機引物,常用長度是6堿基或9堿基,它是一種混合體,在每一個位置上四種堿基都可以隨機的出現(xiàn),如AATCGC,TTAAGCG等,如此可以有46或49種組合。
隨機引物可以根據(jù)堿基情況結(jié)合到幾乎所有的RNA上,包括mRNA、tRNA和rRNA。因此Random Primers適用于mRNA、tRNA和rRNA等所有RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),適用于長的或具有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的RNA,對物種沒有限制,病毒、細菌、植物、動物等都可使用。
3、目前有的公司和實驗室提倡Oligo(dT)和Random Primers混合使用,以此保障獲得更為完整的cDNA。
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