接下來(lái)，讓小編帶您總結(jié)關(guān)于蛋白定量和蛋白變性相關(guān)的知識(shí)點(diǎn)：

1. BCA法的測(cè)定原理是蛋白質(zhì)將銅離子還原成亞銅離子，后者在堿性溶液中與BCA結(jié)合生成紫紅色結(jié)合物，該復(fù)合物在562nm處有吸光值且與蛋白質(zhì)濃度成正相關(guān)性，據(jù)此可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度?？捡R斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色，大光吸收在488nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質(zhì)—色素結(jié)合物在595nm波長(zhǎng)下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。

2. Lowry法又稱為Folin-酚試劑法，首先在堿性溶液中形成銅-蛋白復(fù)合物，然后這一復(fù)合物還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑（Folin-酚上級(jí)），產(chǎn)生鉬藍(lán)和鎢藍(lán)復(fù)合物的深藍(lán)色，這種深藍(lán)色的復(fù)合物在745~750nm處有大的吸收峰，顏色的深淺（吸收值）與蛋白質(zhì)濃度成正比，可根據(jù)750nm的光吸收值大小計(jì)算蛋白質(zhì)的含量。

3. Bradford法又稱為考染法。染料結(jié)合法測(cè)定蛋白質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度較高，可檢測(cè)到微量蛋白，操作簡(jiǎn)便，試劑配制極簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，但干擾因素多?？捡R氏亮藍(lán)G-250具有紅色和青色兩種色調(diào)、在酸性溶液中游離狀度下為棕紅色，當(dāng)它通過(guò)疏水作用與蛋白質(zhì)結(jié)合后，變成藍(lán)色，大吸收波長(zhǎng)從465nm轉(zhuǎn)移到595nm處，在一定的范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)含量與595nm的吸光度成正比，測(cè)定595nm處光密度值的增加即可進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量。