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TTC染色液的原理及作用

TTC染色液的原理及作用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)是脂溶性光敏感復(fù)合物，常用于檢測種子的生存能力以及檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，能與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色。正常腦組織和有活力種子胚組織活細胞中的脫氫酶可以將TTC還原成不溶性的紅色穩(wěn)定的三苯基甲臢(TTF)，如果腦組織細胞或胚種細胞死亡或生活力衰退，則不能染色或染色較淺。因此可以根據(jù)染色部位和染色深淺程度來鑒定腦組織或者種子的活力。結(jié)果判斷正常組織被染成紅色，腦梗...

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普魯士藍染色試劑盒的染色原理

普魯士藍染色試劑盒的染色原理(伊紅法、中性紅法、核固紅法）普魯士藍染色試劑盒分為三種包括伊紅法、中性紅法、核固紅法等。染色原理基本相同，根據(jù)復(fù)染時染色液的不同區(qū)別為這3種方法。含鐵血黃素(hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵、金黃色，故稱為含鐵血黃素。當紅細胞被巨噬細胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(yīng)(Prussianbluereaction)又稱為含鐵血黃素染色，...

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抗熒光衰減封片劑——含DAPI和不含DAPI的區(qū)別

抗熒光衰減封片劑——含DAPI和不含DAPI的區(qū)別抗熒光衰減封片劑是一種用于減緩熒光衰減的封片試劑。以甘油為基礎(chǔ)，加入抗熒光衰減劑，有強烈的抗熒光衰減作用，用于對熒光組織和細胞樣品的封片。封片后，樣品4℃或者-20℃避光可保存2-3周。在封片時用移液槍滴一滴抗熒光衰減封片液，蓋上蓋玻片就可以了。封片劑含細胞核DNA熒光染料DAPI，使實驗操作更簡便；封片劑干燥后會形成一層牢固的涂層，光學透明，非常便于后續(xù)觀察、拍照與儲存。DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-d...

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雷帕霉素的免疫抑制作用

雷帕霉素的免疫抑制作用雷帕霉素雷帕霉素（Rapamycin，RAPA，RPM），又名Sirolimus，分子式為C51H79NO13,分子量為914.2，為白色固體結(jié)晶，熔點為183-185℃，親脂性，溶解于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等有機溶劑，極微溶于水，屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。起初RAPA被研究作為低毒性的抗真菌藥物，1977年發(fā)現(xiàn)RAPA具有免疫抑制作用；1989年開始把RAPA作為治療器官移植的排斥反應(yīng)的新藥進行試用。雷帕霉素(RAPA)通過不同的細胞因子受體阻斷信號傳導，阻...

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細胞凍存液的原理及配制方法

細胞凍存液的原理及配制方法細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在...

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BCA 蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白濃度的原理及特點

BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白濃度的原理及特點堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫藍色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，TritonX-100，Tween不影響檢測結(jié)果，但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用考馬斯亮藍（Bradford）蛋白濃度測定試劑盒。BCA法蛋白濃度檢測比考馬斯亮...

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非變性組織/細胞裂解液的應(yīng)用

非變性組織/細胞裂解緩沖液內(nèi)含非離子型去垢劑，能裂解細胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結(jié)合或酶學活性，因此適宜于進行免疫共沉淀。另外，有些抗體對非變性蛋白具有更高的結(jié)合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點，這種情況應(yīng)該使用非變性裂解。根據(jù)使用量，取每1ml裂解液加入10ulPMSF，使PMSF的終濃度為1mM?；靹騻溆茫≒MSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。1、樣品前處理：對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PB...

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elisa間接法原理及實驗步驟

ELISA實驗中文酶聯(lián)免疫吸附試驗?？捎糜跍y定抗原，也可用于測定抗體。間接法是多種實驗方法中常用方法。elisa間接法原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。elisa間接法操作步驟如下：（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。（3...

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