2016-53
RNA酶又名核糖核酸酶,為白色凍干粉末,可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系,可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制,可以治療乙肝。RNA酶用途說(shuō)明:生化研究,測(cè)定核酸的結(jié)構(gòu)RNase保護(hù)檢測(cè)去除非特異結(jié)合的RNA分析RNA序列水解蛋白樣品中的RNA純化DNA此外,它具有顯著的細(xì)胞毒性,可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系,可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制,可以治療乙肝。破碎細(xì)胞和滅活RNA酶同步進(jìn)行的方法用強(qiáng)烈變性如鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白質(zhì),導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎,核蛋...
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2016-53
RNA酶抑制劑具有廣譜的RNA酶抑制作用,包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。?分子量是50kDa的蛋白質(zhì)通過(guò)非共價(jià)鍵與RNA酶以1:1的比例結(jié)合發(fā)揮它的抑制作用。RNA酶抑制劑與RNA酶結(jié)合的有效濃度時(shí)10-14M。而且,RNA酶抑制劑的動(dòng)力學(xué)結(jié)合是非常迅速的,確保與RNA酶的迅速絡(luò)合,并對(duì)其產(chǎn)生迅速的抑制作用。常見(jiàn)的RNA酶抑制劑1、焦碳酸二乙酯(DEPC):是一種強(qiáng)烈但不*的RNA酶抑制劑,他通過(guò)和RNA酶的活性基因團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性,從而抑制酶的活性。...
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2016-53
RNA的化學(xué)性質(zhì)比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團(tuán)能直接被RNA酶利用來(lái)作為活性因子,從而使得RNA酶無(wú)需金屬離子就能發(fā)揮活性。由于RNA酶在環(huán)境中廣泛存在,特別是RNaseA,結(jié)構(gòu)極其穩(wěn)定,不能通過(guò)高溫高壓滅菌失活,因而極難消除,對(duì)保持RNA樣品的完整性構(gòu)成極大的威脅。由于RNaseA類酶依賴于活性位點(diǎn)處的組氨酸殘基起催化作用,因此能被組氨酸烷化劑DEPC所抑制。避免RNA酶的污染的方法:1.塑料制品:盡可能使用無(wú)菌、一次性塑料制品。已標(biāo)明RNase...
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2016-427
福林酚法測(cè)蛋白含量早是由Lowry確定的測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的基本方法。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度。福林酚法測(cè)蛋白含量原理:蛋白質(zhì)與福林酚試劑反應(yīng),生成深藍(lán)色復(fù)合物.藍(lán)色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比.可用分光光度計(jì)于500nm波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定.與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照,而確定蛋白質(zhì)含量.福林酚法測(cè)蛋白含量所需試劑Folin—酚試劑:1.試劑甲1)4%碳酸鈉溶液2)0.2...
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2016-427
異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。當(dāng)有乳糖存在時(shí),lac操縱子(元)即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子(元)體系中,真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞,經(jīng)b-半乳糖苷酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白,使蛋白構(gòu)象變化,導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。材料1、誘導(dǎo)表達(dá)材料(1)LB(Luria—Bertani))培養(yǎng)基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl1...
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2016-427
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導(dǎo)物,X-gal為生色底物,二者共同用于藍(lán)白斑篩選。IPTG可誘導(dǎo)載體lac操縱子DNA區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,該片段可與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實(shí)現(xiàn)基因內(nèi)互補(bǔ)(α互補(bǔ))。IPTG誘導(dǎo)原理先E.coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?;D(zhuǎn)移酶,此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié)?基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結(jié)合,使操縱子(元)受...
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2016-426
CCK-8為細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒,細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。必須強(qiáng)調(diào)指出,通過(guò)細(xì)胞分裂,可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì),平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去??梢?jiàn),細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。CCK8實(shí)驗(yàn)步驟如下。CCK-8實(shí)驗(yàn)步驟1、在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(37℃,5%CO2)。2、向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6、12、24或48小時(shí))。4、向...
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2016-426
CellCountingKit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)?;盍τ?jì)算:.細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度...
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