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DNA產(chǎn)物純化常見問題

常見問題未回收或回收率低可能原因膠塊未全部溶解建議解決方案溶解凝膠時應(yīng)該置于65℃水浴，不斷上下顛倒，確定膠塊*溶解后再進行下一步操作。如果凝膠濃度較大，可增加溶膠液使用量?？赡茉蚰z塊太大(400mg)建議解決方案如果需要處理的膠塊太大，應(yīng)該先將其切成小塊，做兩次回收或選用大量型回收試劑盒。可能原因電泳緩沖液pH過高建議解決方案硅膠膜在高鹽低pH值時可結(jié)合DNA，在低鹽高pH值條件下洗脫。如果電泳緩沖液pH值太高，會導(dǎo)致DNA無法結(jié)合或降低結(jié)合率，可在溶膠后加入3MNaAc...

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DNA純化回收

DNA產(chǎn)物純化試劑盒簡介：對于TA克隆、酶切或者直接測序等試驗來說，純化PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物是非常必要的。以TA克隆為例，其成功率跟目的片段的純度高低有重要關(guān)系。雖然未經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物也可以跟載體連接，但會增加篩選陽性克隆的難度，因為PCR產(chǎn)物中的dNTP和引物等可能也會跟載體連接。在進行連接試驗時，這些非特異性的產(chǎn)物會跟特異性產(chǎn)物相互競爭，從而導(dǎo)致連接效率下降。DNA的片段純化回收原理在獲得DNA的片段后，一般采用吸附材料的方法去除雜質(zhì)和純化DNA的片段。目前大多數(shù)生物...

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質(zhì)粒提取常見問題

質(zhì)粒提取常見問題常見問題1:可能原因:大腸桿菌老化建議解決方案:請涂布平板培養(yǎng)后，重新挑選新菌落進行液體培養(yǎng)可能原因:質(zhì)粒拷貝數(shù)低建議解決方案:由于使用低拷貝數(shù)載體引起的質(zhì)粒DNA提取量低，可更換具有相同功能的高拷貝數(shù)載體?？赡茉?溶液使用不當(dāng)建議解決方案:溶液P2和P3在溫度較低時可能出現(xiàn)渾濁，應(yīng)置于37℃保溫一段時間，直溶液變?yōu)榍辶梁蟛拍苁褂?。可能原?質(zhì)粒未全部溶解(尤其質(zhì)粒較大時)建議解決方案:洗脫溶解質(zhì)粒時，可適當(dāng)加溫或延長溶解時間。可能原因:洗脫液加入位置不正確...

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質(zhì)粒提取原理及流程

質(zhì)粒提取原理及流程質(zhì)粒提取試劑盒簡介：質(zhì)粒(Plasmid)是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細胞中。質(zhì)粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力，能在子代細胞中保持恒定的拷貝數(shù)，并表達所攜帶的遺傳信息。質(zhì)粒提取原理及流程：較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑(如Triton和SDS)裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質(zhì)粒(15kb)。堿裂解法是一種應(yīng)用為廣...

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基因組DNA提取常見問題

基因組DNA提取常見問題分析常見問題1：洗脫產(chǎn)物的DNA量很少或沒有可能原因：所提樣品材料老化或反復(fù)凍融導(dǎo)致基因組DNA含量下降建議解決方案：應(yīng)選擇新鮮的樣品材料，如新鮮血液、新鮮菌液、剛離體的動物組織或幼嫩的植物組織等，不能及時處理的樣品應(yīng)立即放入液氮或-70℃低溫保存，以免DNA降解?？赡茉颍簶悠菲票诨蛄呀獠?導(dǎo)致基因組DNA未充分釋放建議解決方案：動、植物材料應(yīng)在液氮中充分研磨勻漿，G+細菌、酵母等破壁較困難的樣品應(yīng)用溶菌酶、酵母破壁酶或機械方式協(xié)助破壁，不同樣品的細...

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OCT包埋劑/櫻花冷凍切片包埋劑包埋流程

OCT包埋劑/櫻花冷凍切片包埋劑包埋流程1.將放在蔗糖溶液中的組織塊取出，放入20gL-1蔗糖與OCT包埋劑1：1體積比例混合液中，室溫浸泡2h2.移入OCT包埋劑中室溫浸泡4h，更換新的OCT包埋劑，室溫浸泡6h.3.將標本置于托物臺，用恒冷箱切片機切片（一般-22℃），片厚10μm，貼于預(yù)處理的載玻片上，-20℃冰箱保存。

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幾種常見卡拉膠

卡拉膠（C8830）又稱角叉膠，角叉菜膠，鹿角菜膠等，是一種從海洋紅藻中提取的多糖的統(tǒng)稱，是多種物質(zhì)的混合物?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上是由硫酸基化的或者非硫酸基化的半乳糖和3，6脫水半乳糖通過a-1，3糖苷鍵和b-1，4糖苷鍵交替連接而成的。是一種多聚物，分子量在20萬以上?？ɡz在生化研究中常被用做凝膠劑、乳化劑或者穩(wěn)定劑，也常用作食品添加劑?？ɡz也分為不同的種類。我們一起來了解一下常用的幾種卡拉膠。1、l型：是一種軟性膠質(zhì)固體。一種熱可逆的凝膠體。其硫酸鹽化程度在28～35%。有吸濕...

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溴代十六烷基*胺（CTAB）的使用方法

溴代十六烷基*胺（CTAB）的使用方法溴代十六烷基*胺簡稱：CTAB，英文名稱Cetyltrimethylammoniumbromide，又稱鯨蠟烷*基溴化銨，十六烷基*基溴化銨，白色粉末狀，是一種季銨鹽溶于水，在酸性溶液中保持穩(wěn)定。是一種陽離子去垢劑，用于從大量產(chǎn)生粘多糖的有機體如植物以及某些革蘭氏陰性菌(包括E.coli的某些株)中制備純化DNA。CTAB結(jié)構(gòu)式原理：CTAB是一種陽離子去污劑，具有從低離子強度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在這種條件下，蛋白質(zhì)和中性...

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