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提取酵母質(zhì)粒步驟跟方法

酵母質(zhì)粒提取可以用試劑盒提取，也可以直接用裂壁酶處理后采用堿裂解法提取質(zhì)粒。推薦使用索萊寶供應(yīng)的酵母質(zhì)粒提取試劑盒，無需使用酚、CCL4等有毒試劑，操作安全。下面我們就用索萊寶酵母質(zhì)粒提取試劑盒為例講解酵母質(zhì)粒提取方法和步驟。1.接種單菌落(待檢測(cè)酵母細(xì)胞)于25mLYNB(補(bǔ)加氨基酸營(yíng)養(yǎng)物)培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)隔夜。2.第二天取一滴菌液于進(jìn)行顯微鏡下觀察,目鏡用16,物鏡用40倍觀察細(xì)胞壁破碎前的狀態(tài),其成桿狀,流動(dòng)性比較下.3.取10ml的培養(yǎng)酵母菌液,5000g離心...

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提取DNA的方法（總結(jié)）

dna提取是一項(xiàng)經(jīng)常要做的實(shí)驗(yàn)，下面我們就總結(jié)了四種dna提取方法并做詳細(xì)說明和比較。一.濃鹽法提取dna：A.利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的CCL4一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質(zhì),此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及CCL4相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來.B.也可用0.15MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白...

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生物實(shí)驗(yàn)中瓊脂粉常見問題

問題1：使用瓊脂粉配置的MS培養(yǎng)基顏色明顯變黃？影響實(shí)驗(yàn)？產(chǎn)品批次不一樣，有些批次的瓊脂粉就是顯黃色，不是質(zhì)量問題，不影響使用。進(jìn)口產(chǎn)品也有直接指出瓊脂粉是黃色為正常現(xiàn)象。問題2：凝膠強(qiáng)度？答：凝膠強(qiáng)度（1.5%）≥800g/cm2800-1200g/cm21.5g瓊脂粉溶于100ml水，溶解凝固后要放置20℃恒溫箱中靜置10小時(shí)以上，再測(cè)定凝膠強(qiáng)度。與溫度，水質(zhì)等有關(guān)。一般瓊脂粉和卡拉膠，夏季使用濃度要比冬季偏高。夏季溫度高，保存時(shí)間久，可能會(huì)有部分降解，所以要達(dá)到同樣凝膠...

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常用的剛果紅培養(yǎng)基，你知道屬于哪一類培養(yǎng)基嗎？

培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料。一般分為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基等，那我們常用的剛果紅培養(yǎng)基屬于哪一類的？剛果紅培養(yǎng)基屬于哪一類培養(yǎng)基：剛果紅培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基,因?yàn)楹竽茉谂囵B(yǎng)基上看到因分解纖維素形成的透明圈,在液體培養(yǎng)基中不可能形成透明圈.是鑒定培養(yǎng)基,因?yàn)樵撆囵B(yǎng)基上也能生長(zhǎng)其他微生物,例如有些自養(yǎng)型微生物就能在該培養(yǎng)基上生存；不過只有纖維素分解菌周圍才會(huì)形成透明圈,從而將該菌落鑒定出來.也是區(qū)分選擇培養(yǎng)基,例如在配...

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感受態(tài)細(xì)胞相關(guān)問題

如何選擇合適的宿主菌：1、所選的宿主菌株應(yīng)對(duì)所用質(zhì)粒的抗生素抗性基因敏感。2、如進(jìn)行藍(lán)/白斑篩選，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區(qū)應(yīng)在染色體或附加體上缺失掉(lacZΔΜ15)。*0和DH5α都能用于藍(lán)/白斑篩選。3、要表達(dá)重組蛋白，可使用帶有可誘導(dǎo)的T7RNA聚合酶基因的菌株，如BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS。4、使用pGEM載體克隆大片段時(shí)(7-8kb)，經(jīng)轉(zhuǎn)化的菌株在30℃而不是在37℃生長(zhǎng)，更有利于復(fù)蘇。作簡(jiǎn)單的亞克隆連接實(shí)驗(yàn)，亞克隆轉(zhuǎn)化效率的感受...

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凝膠電泳操作注意事項(xiàng)

1.緩沖系統(tǒng)：在沒有離子存在時(shí)，電導(dǎo)率小，DNA不遷移，或遷移極慢，在高離子強(qiáng)度的緩沖液中，電導(dǎo)很高并產(chǎn)熱，可能導(dǎo)致DNA變性，因此應(yīng)注意緩沖液的使用是否正確。長(zhǎng)時(shí)間高壓電泳時(shí)，常更新緩沖液或在兩槽間進(jìn)行緩沖液的循環(huán)是可取的。2.瓊脂糖：不同廠家、不同批號(hào)的瓊脂糖，其雜質(zhì)含量不同，影響DNA的遷移及熒光背景的強(qiáng)度，應(yīng)有選擇地使用。3.凝膠的制備：凝膠中所加緩沖液應(yīng)與電泳槽中的相一致，溶解的凝膠應(yīng)及時(shí)倒入板中，避免倒入前凝固結(jié)塊。倒入板中的凝膠應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡，影響電泳結(jié)果。如果...

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實(shí)驗(yàn)室中的化學(xué)試劑的防護(hù)之十二烷基硫酸鈉

SDS，這是一種常用試劑，全名是十二烷基硫酸鈉，大家經(jīng)常用到，對(duì)于分子研究的科咖們，幾乎每天都會(huì)用到。先還是讓我們來看看萊寶百科吧。萊寶百科：十二烷基硫酸鈉（SDS）是一種白色粉末狀物質(zhì)，易飄飛，是常用的生化試劑，分子式是C12H25NaSO4,CAS號(hào)是151-21-3。主要是配置各種溶液，較多用于蛋白質(zhì)電泳，變性等試驗(yàn)，也會(huì)用于質(zhì)粒的提取。具有毒性，屬于急性毒性，對(duì)呼吸道有刺激作用，容易損傷呼吸道。好了萊寶百科的解釋，我們看完了。知道了的危害，我們來了解一下防護(hù)吧！十二烷...

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RNA提取詳解

RNA提取RNA提取試劑盒簡(jiǎn)介：RNA是一種重要的遺傳信息分子，因此完整RNA的提取和純化，是進(jìn)行Northern雜交、RT-PCR、定量PCR等RNA相關(guān)研究的重要前提。RNA提取的原理與方法：細(xì)胞中的RNA可以分為信使RNA、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA和核糖體RNA三大類，這三類RNA都存在于細(xì)胞質(zhì)中,因此不同組織總RNA提取的實(shí)質(zhì)就是將細(xì)胞裂解，釋放出RNA，并通過不同方式去除蛋白、DNA等雜質(zhì)，終獲得高純RNA產(chǎn)物的過程。RNA提取流程一、樣品處理從各種不同來源樣品(如細(xì)菌、酵母、血...

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